Гепатит С. Количественный анализ. Норма, расшифровка результатов

Исследования РНК вируса гепатита С является важнейшей процедурой, которая позволяет с большой точностью устанавливать продолжительность и методы лечения больных. Диагностика заболевания состоит из нескольких различных исследований крови, таких как:

Исторические сведения

После открытия «австралийского антигена» и внедрение в практику специфической диагностики гепатита В оказалось, что у определенной части больных посттрансфузионным гепатит отсутствуют маркеры гепатита В.

В середине 70-х годов. было установлено, что не все вирусные гепатиты относятся к гепатитам А и В, и поэтому начались научные исследования для определения возбудителей гепатитов «ни А, ни В». Гепатит «не В» с парентеральным механизмом заражения получил название «гепатит С». Первые сведения о возбудителе этого заболевания были получены в опытах на шимпанзе. Так, путем заражения обезьян вируссодержащим материалом, который предварительно пропускали через фильтр с известными размерами пор, был установлен размер возбудителя (около 50 нм).

Обработка вируссодержащего материала различными химическими препаратами позволило установить чувствительность вируса к дезинфекционным веществам и доказало, что он чувствителен к жирорастворимым средствам.

На основании полученных в этих опытах данных вирус (еще до открытия) был отнесен к семейству Flaviviridae. Используя плазму инфицированных шимпанзе, M. Houghton и соавт. в 1988 году с помощью новых молекулярно-биологических методов удалось клонирование и секвестрацию генома вируса гепатита С (ВГС).

Возбудитель гепатита С — РНК-содержащий вирус, который относится к семейству Flaviviridae. Геном вируса — одноцепочная линейная РНК положительной полярности; в геноме имеются две зоны, кодирующие структурные и неструктурные белки (см. рисунок).

У инфицированных постоянно происходит мутация вируса. Существенные изменения нуклеотидных последовательностей возникают в участках генома вируса, обозначеных как Е1 и Е2 (гипервариабельные и вариабельные участки). Эти участки генома играют ведущую роль в уклонении вируса от иммунного ответа организма и вызывают длительную его персистенцию.

Изменения в гипервариабельных областях, приводящие к изменениям в антигенных детерминантах, могут происходить настолько быстро, что иммунное реагирование на соответствующий антиген запаздывает. Репродукция ВГС в основном происходит в гепатоцитах печени, возможно его размножения в мононуклеарах периферической крови, что отрицательно влияет на состояние иммунной системы больного человека.

Количественное определение вируса Гепатита С методом ПЦР в режиме реального времени

Определение вируса гепатита С методом полимеразной цепной реакцией (ПЦР) отличается высокой чувствительностью и специфичностью (98%). Принцип ПЦР заключается в идентификации уникального фрагмента РНК, принадлежащего вирусу, после многократного удвоения исследуемого генетического материала в пробирке.

В сети КДЛ «ОЛИМП» ПЦР-исследования выполняются в режиме REAL-TIME – это означает, что после каждого аппаратного цикла (амлификации) происходит измерение количества РНК в биоматериале. Данная процедура сводит вероятность ложноположительного результата практически к нулю! Такая точность позволяет выставить диагноз гепатита С.

Количественный метод отображает вирусную нагрузку, то есть меру тяжести гепатита, путем указания количества вирусных частиц в крови пациента. Прежде всего, анализ необходим в нескольких случаях: при положительном качественном («положительно») выявлении вируса гепатита С, а также для мониторинга эффективности противовирусной терапии и определения тактики лечения.

Вирусная нагрузка измеряется в Международных Единицах на миллилитр крови. Меньше 1 млн – считается низкой, свыше – высокой. Чувствительность анализатора составляет 300 МЕ/мл, если количество меньше данной цифры – то это считается «отрицательным» результатом.

Показания к назначению

Обнаружение РНК вируса гепатита С в плазме крови методом ПЦР;

Определение вирусной нагрузки ВГС;

Оценка эффективности лечения и определение тактики противовирусной терапии.

Результат выдается в виде количества вирусных частиц. Пример: «1,7*10 в 6ст. МЕ/мл », так как 1 МЕ = 4 вирусным копиям гепатита С. то 1,7 х 4 = 6,8. Результат означает, что вирусная нагрузка равна 6 800 000 копий вируса в 1 мл плазмы крови. Нефротический синдром клинические рекомендации

1 МЕ = 4 вирусным копиям гепатита С.

Результат меньше 300 МЕ/мл – считается отрицательным.

Описание

Количественное определение РНК вируса гепатита С методом ПЦР (вирусная нагрузка).

Аналитические показатели. Выявление РНК вируса гепатита С (hepatitis С virus) методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) и определение вирусной нагрузки в сыворотке крови:

  • определяемый фрагмент – консервативный участок генома вируса гепатита_С;
  • диапазон достоверности теста теперь составляет 43 – 6,90 Е7 МЕ/мл;
  • анализируются генотипы 1- 6 (1, 2, 3, 4, 5, 6);
  • чувствительность теста составляет от 15 МЕ/мл;
  • специфичность теста составляет 99,6%.
Читайте также:  Как принимать медвежью желчь при камнях в желчном пузыре

Количественная характеристика содержания РНК HСV в клинических образцах важна для оценки эффективности противовирусной терапии.

Подготовка

Исследование желательно проводить натощак. Между последним приёмом пищи и взятием крови должно пройти не менее 8 часов.

Показания

  • Положительный качественный тест на наличие РНК вируса гепатита С в сыворотке крови.
  • Определение тактики лечения пациентов.
  • Точная оценка эффективности лечения.

Интерпретация результатов

Внимание! Если тест выполняется на оборудовании компании Хоффман-ля-РОШ по жёстко стандартизованной технологии PCR в реальном времени, то результат, в отличие от его российских аналогов, выдаётся в принятых международных единицах (МЕ).Следует отметить, что это не умаляет диагностической ценности отечественного аналога этого теста, так как на территории РФ допустимы иные технологические стандарты и применение единиц измерений в копий/мл. Референсные значения: в норме — «не обнаружено».Единицы измерения:МЕ/мл количество выявленной РНК вируса гепатита C.Форма выдачи результатов для тестов на оборудовании компании Хоффман-ля-РОШ по жёстко стандартизованной технологии PCR в реальном времени

Источники: _gepatologu/12_05__ivanna_6729/, -opredelenie-virusa-gepatita-s-metodom-pcr-v-rezhime-realnogo-vremeni, -metod-menee-300-kopml-gepatit-b/

Комментариев пока нет!

Source:

Препараты для профилактики печени после алкоголя

HCV-анализ крови: что это значит и когда его назначают?

Анализ крови на HCV – один из методов диагностики вируса гепатита С. Данный тест назначается при наличии симптомов гепатита С, повышении уровня печеночных трансаминаз, а также обследованиях лиц из группы риска по заражению вирусными гепатитами. В последнем случае совместно с анализом крови на HCV проводят анализ крови HBs Ag.

HCV (hepatitis C virus вирус гепатита С) относится к семейству флавивирусов. Впервые он был обнаружен в 1988 году группой исследователей из американской биотехнологической компании Хирон . Геном HCV представлен молекулой РНК, поэтому скорость мутации вируса весьма высока. У людей, больных вирусом гепатита С, выявляют вирусные частицы, геномы которых различаются между собой на 1-2%. Такая особенность популяции вируса позволяет ему успешно размножаться вопреки защитным реакциям иммунитета человека. Различия в геномах вируса могут влиять на протекание инфекции и результаты лечения.

По данным Всемирной организации здравоохранения, на сегодняшний день вирусом HCV заражено около 150 000 000 человек, каждый год вирус гепатита С является причиной смерти более 350 000 больных.

Способы передачи гепатита С

Вирус гепатита С передается с инфицированной кровью, например, реципиенту от донора крови или органов, младенцу от инфицированной матери, при половых контактах, при использовании нестерильных шприцев в медицинских учреждениях и инструментов для тату и пирсинга в салонах.

Болезнь может протекать в острой форме, длящейся несколько недель и в хронической, результатом которой могут стать рак или цирроз печени.

HCV-анализ крови: что это значит с точки зрения иммунологии?

Анализ крови на HCV основан на детекции специфических иммуноглобулинов классов IgG и IgM, поэтому данный вид исследования иногда называют анализ крови anti-HCV. Иммуноглобулины — это специфические белки иммунной системы, они вырабатываются В-лимфоцитами в ответ на обнаружение чужеродных белков в организме. При заражении вирусом гепатита С иммуноглобулины вырабатываются к белкам оболочки вируса, нуклеокапсидному коровому белку и неструктурным белкам NS. Появление первых антител к вирусу происходит не ранее 1-3 месяцев после заражения. По выявленным антителам врач может определить фазу инфекции (острая, латентная или реактивация). Специфические антитела к гепатиту С можно обнаружить даже по прошествии 10 лет после заболевания, однако концентрация их низка, и от повторного заражения вирусом защитить они не способны.

Диагностирование РНК вируса гепатита С с разными генотипами | Гепатит С

Генотипирование РНК гепатита C – это определение того, к какому штамму относится возбудитель. Исходя из этого пациент сможет купить препарат, предназначенный для целевого терапевтического курса.

Ученые установили, что существует 6 генотипов. Некоторые из них имеют свои субтипы, общее количество которых достигает десятка.

Необходимость определения генотипа HCV

Проведение генотипирования позволит прояснить множество моментов:

  1. Выбор терапевтической схемы.
  2. Длительность лечения.
  3. Предполагаемая продуктивность терапии.
  4. Вероятность развития осложнений.

Вирус гепатита C имеет 6 генотипов. Ниже мы рассмотрим каждый из них, приведем характерные особенности:

  • Генотип 1. Считается труднейшим из видов. Можно заказать препарат для лечения, содержащий одновременно оба действующих вещества (Hepcinat Plus). Врачи рекомендуют не универсальную, а специализированную схему, в состав которой входит Софосбувир и Ледипасвир.
  • Генотип 2. Менее распространен. Нет высокой вирусной нагрузки. Отличной подойдет схема Софосбувир и Даклатасвир.
  • Генотип 3. Легко лечится. В 80% случаев прогноз положительный. Отсутствие лечения может спровоцировать серьезные осложнения (фиброз, цирроз). Рекомендуется универсальная схема лечения (Sofosbuvir и Daclatasvir).
  • Генотипы 4, 5, 6. Встречаются редко. Можно заразиться в азиатских странах. Рекомендуемая терапия включает в себя два вещества – Софосбувир и Велпатасвир.

Как определяется вирусный штамм

Определение генотипа производится при помощи специализированного лабораторного исследования – анализа ПЦР с генотипирование. Вирус не остается в прежнем виде, продолжает мутацию, поэтому человеческий иммунитет не способен противостоять ему.

Читайте также:  Побочные действия урсофалька у грудничков

Анализ крайне чувствительный. Его точность составляет 99%. Лабораторное исследование производится при условии, что в результате других диагностических мероприятий был обнаружен ВГС в роки.

Индийские производители предусмотрели возможность купить препарат от разных генотипов HCV. После полной диагностики пациент сможет заказать препарат, основываясь на сформированной клинической картине.

Распространенные в России генотипы

На территории РФ основными считаются три генотипа (1, 2, 3). Иногда встречаются субтипы. Рассмотрим этот аспект подробнее.

Наиболее встречающийся субтип. Течение мягкое, отсутствуют серьезные осложнения. Вероятность излечения составляет 98%. Цирроз печени развивается с 30% вероятностью. Болезнь протекает преимущественно в острой форме.

Встречается на Дальнем Востоке. К группе риска относятся люди, предпочитающие путешествия в Таиланд. 80% людей заразились во время переливания крови.

Эта разновидность тяжелее поддается лечению, нередко требуется 24-х недельный терапевтический курс. Присутствует почти вся характерная симптоматика. Лица, пораженные этим типом, имеют склонность к развитию онкологии печени.

Заболевание нередко присутствует в бессимптомной форме, который может длиться десятилетия. Человек испытывает серьезное недомогание, сильную усталость.

С 70% вероятностью HCV может прогрессировать в хроническую форму.

Генотип 2

Переносится гораздо легче, нежели иные разновидности. Отсутствуют серьезные осложнения, способные привести к летальному исходу. Лечение проходит без сопутствующих проблем. Болезнь распространена в нескольких регионах Российской Федерации.

По истечению инкубационного периода возникают следующие симптомы:

  • рвотные позывы;
  • мигрени;
  • физическое недомогание;
  • повышение температуры;
  • болевые ощущения в суставах;
  • дискомфорт в правом подреберье;
  • увеличение печени в размерах;
  • желтизна кожных покровов.

Болезнь излечивается в 70-100% случаев.

Генотип 3

Распространенным считается субтип 3а. Он развивается у лиц, страдающих алкогольной или наркотической зависимостью. Длительное время не наблюдаются симптомы.

При переходе в острую фазу присутствуют проблемы с ЖКТ, мигрени, боли в суставах, повышение температуры тела, пожелтение кожи и белков глаз.

Точные прогнозы дать сложно. Статистика показывает, что женщины излечиваются от болезни чаще, нежели мужчины. Основным критерием выступает вирусная нагрузка, наличие дополнительных патологий, возраст. Терапевтический курс пройдет успешно и быстро при условии, что печени не был нанесен фатальный ущерб. В противном случае лечение растянется на длительное время.

Преимущества ПЦР-анализа

Во-первых, это метод ранней диагностики, который позволяет выявить генетический материал вируса. ИФА-анализ способен определить только вырабатываемые организмом в ответ на инфекцию вещества (иммуноглобулины). С момента заражения гепатитом С до начала иммунного ответа может пройти несколько недель и даже месяцев, и в этот период ИФА-анализ неэффективен. ПЦР-анализ уже на первой неделе инфицирования дает ответ.

Второе преимущество ПЦР-анализа — низкая вероятность ошибки. При исследовании определяют характерный только для одного вида возбудителей участок генетического материала, что дает возможность исключить ложный результат. ИФА-анализ показывает наличие антител, которые выделяются против разных вирусов (перекрестные антитела).

Преимущества ПЦР-анализа

Как часто проводится лабораторное исследование?

Первично полимеразная цепная реакция проводится людям, у которых при иммуноферментном анализе были выявлены антитела к возбудителю гепатита. В данном случае она назначается для подтверждения факта заражения человека и установления стадии болезни. Кроме того, анализ позволяет определить субтип вируса, что особенно важно для выбора лекарственных средств.

Следующим периодом для обязательного лабораторного исследования является 3 месяца от начала противовирусной терапии. Диагностика дает возможность оценить эффективность медикаментов, откорректировать дозу или заменить их.

Помимо основных анализов, ПЦР может дополнительно проводиться на 4 и 24 неделях от начала лечения. Положительный прогноз болезни подтверждается уменьшением вирусной нагрузки по истечении трех месяцев терапии. Так, например, она должна снизиться с 1 миллиона МЕ/мл до нескольких сотен тысяч.

Если концентрация патогенных агентов в крови остается на прежнем уровне или несколько нарастает, это указывает на неэффективность противовирусных средств и требует их замены. С помощью ПЦР в конце лечения удается подтвердить выздоровление пациента.

Чтобы правильно трактовать результаты лабораторной диагностики, требуется консультация гепатолога или инфекциониста. Учитывая большую частоту ложных ответов при ИФА, анализ используют исключительно для первичного скрининга. Для более тщательного обследования пациента применяется полимеразная цепная реакция.

Цена ПЦР-анализа на гепатит С

Набирает популярность метод ТМА (транскрипционная амплификация), известный пока только за пределами России. ТМА обладает хорошей чувствительностью (5–10 МЕ/мл).

Количественный анализ на гепатит С расшифровкой поможет пациенту вовремя предпринять необходимые меры для излечения заболевания либо быть уверенным, что ему ничего не угрожает. А также уберечь окружающих его знакомых и родственников от возможности заражения.

ПЦР-диагностика на вирусный гепатит С опережает иные методы по чувствительности, низкой вероятности ошибок и другим показателям:

  • Позволяет выявить вирус на самых ранних стадиях, когда концентрация его в крови ничтожно мала. Для сравнения, иммунофлюоресцентный анализ (ИФА) реагирует только на иммуноглобулины, а они вырабатываются лишь через несколько недель в ответ на инфекцию. В то же время ПЦР реагирует на сам антиген и показывает присутствие вируса уже через 5 дней после заражения.
Цена ПЦР-анализа на гепатит С
  • Ложные результаты возникают гораздо реже, чем у других методов. Так, у ИФА возможны ложные результаты на гепатит при появлении перекрестных антител, но ПЦР реагирует непосредственно на патогены и такой погрешности не имеет.
  • ПЦР – высокочувствительный метод. Анализ реагирует на присутствие РНК вируса гепатита уже 10-100 клеток в пробе и дает результат еще задолго до появления первых симптомов.
  • В отличие от культуральных методов исследования, ПЦР проводится методом высокотехнологичной автоматизированной амплификации, что позволяет проводить тестирование в день забора.
Читайте также:  Цирроз печени: как лечить заболевание?

Тест универсален и позволяет обнаружить несколько типов возбудителей гепатита в одной биологической пробе.

ПЦР-диагностика гепатита имеет и свои недостатки. Главный из них связан со способностью микроорганизмов к мутации. Вирусы гепатита приспосабливаются к условиям окружающей среды, и их генотип меняется. Когда это происходит, диагностическая система не может уловить гибрид. Второй недостаток ПЦР связан с возможностью получения ложноположительного и ложноотрицательного результата.

Во-первых, это метод ранней диагностики, который позволяет выявить генетический материал вируса. ИФА-анализ способен определить только вырабатываемые организмом в ответ на инфекцию вещества (иммуноглобулины). С момента заражения гепатитом С до начала иммунного ответа может пройти несколько недель и даже месяцев, и в этот период ИФА-анализ неэффективен. ПЦР-анализ уже на первой неделе инфицирования дает ответ.

Второе преимущество ПЦР-анализа – низкая вероятность ошибки. При исследовании определяют характерный только для одного вида возбудителей участок генетического материала, что дает возможность исключить ложный результат. ИФА-анализ показывает наличие антител, которые выделяются против разных вирусов (перекрестные антитела).

В государственных учреждениях пройти анализ можно бесплатно, требуется только направление от гепатолога или инфекциониста.

Цена ПЦР-анализа на гепатит С

Платное исследование доступно во всех крупных городах РФ. На цену влияет тип исследования, используемое оборудование, необходимое для анализа время.

В Москве и Санкт-Петербурге качественный ПЦР-анализ на гепатит С стоит от 600 до 900 рублей, в области – от 300 до 800 рублей.

Количественный ПЦР-анализ на гепатит С стоит от 17000 до 22000 рублей, на гепатит В – от 1200 до 10000 рублей.

Чтобы получить достоверные результаты ПЦР-анализа на гепатит С, надо обращаться только в зарекомендовавшие себя лаборатории. В этом случае вопрос стоимости исследования отходит на второй план.

Расшифровка результатов

Как правило, расшифровка качественной ПЦР не представляет сложности. Но во избежание ошибочной трактовки, с полученным из лаборатории бланком следует обратиться к врачу. Варианты, что означает та или иная разновидность ПЦР, приведены в таблице.

Расшифровка результатов
Вид исследования Возможный результат и предполагаемая расшифровка
Качественная ПЦР
Расшифровка результатов

Отрицательный: человек здоров либо концентрация вирусной РНК в крови слишком мала для детекции.

Расшифровка результатов

Положительный: человек инфицирован

Расшифровка результатов
Количественная

Проводится, если обнаружено РНК вируса качественным методом исследования.

В зависимости от того, какие результаты анализов получены, определяется уровень вирусной нагрузки

HCV — анализ крови — что это такое?

Одно из самых сложных и распространенных заболеваний конца прошлого столетия – заражение вирусом гепатита С. В развитых странах распространенность болезни достигает 2%, в то время как общее количество больных во всем мире составляет 500 миллионов человек. Инфекция была выявлена гораздо позже своих предшественников: гепатита А и В — и поначалу носила название ни А, ни В инфекции . Вместе с ростом наркомании с каждым годом растет и количество инфицированных. Причиной всему служит способ инфицирования: при внутривенном введении наркотика.

Цирроз, появившийся под воздействием гепатита С, является хроническим неизлечимым заболеванием. На ранних стадиях можно замедлить его течение, в запущенном случае спасти человека может только трансплантация печени.

HCV — анализ крови — что это такое?

Узнав о положительном результате на гепатит С, не нужно сразу впадать в панику. Сначала необходимо проверить состояние своей печени и приступать к борьбе с инфекцией и сопутствующими патологиями. Лечение длительное и дорогое, но дает пациенту шанс на долгую и здоровую жизнь.

» Что делать при гепатите

Расшифровка ПЦР-исследования на гепатит С

Расшифровкой ПЦР-анализа и иммуноферментного анализа на гепатит С должен заниматься гепатолог или инфекционист. Анализировать результаты ПЦР необходимо в комплексе с данными биохимического анализа крови, биопсии и УЗИ. Только квалифицированный врач сможет проанализировать результаты исследований и, основываясь на них, назначить правильное лечение.

Расшифровка качественного анализа .

В анализируемом биологическом материале обнаружен генетический материал возбудителя. Инфицирование подтверждено.

Когда необходимо определить наличие вируса гепатита С в организме, следует провести анализ РНК, расшифровка которого и даст нужную информацию. С помощью этого анализа можно выяснить, есть ли у пациента следы заболевания, а также определить, как далеко оно зашло, о каком именно типе патологии идет речь. После выяснения этой информации можно назначать терапию наиболее подходящего вида.